X-gal

X-gal
X-gal（5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β – D-ガラクトピラノシドの略称BCIG）は、置換インドールに結合したガラクトースからなる有機化合物です。この化合物は、1964年にミシガン州デトロイトのジェロームホルウィッツと共同研究者によって合成されました。正式な化学名は、しばしば短縮されて精度が低くなりますが、ブロモクロロインドキシルガラクトシドなどの扱いにくいフレーズにもなります。インドキシルからのXは、X-gal収縮におけるXの原因である可能性がX-galは、分子生物学で酵素、β-ガラクトシダーゼの存在をテストするためによく使用されます。また、組織化学および細菌学におけるこの酵素の活性を検出するためにも使用されます。X-galは、酵素触媒による加水分解の結果として、インディゴ染料と同様の不溶性の青色化合物を生成する多くのインドキシル配糖体およびエステルの1つです。 X-gal 名前 IUPAC名 5-ブロモ-4-クロロ -1H-インドール-3-イルβ- D-ガラクトピラノ シド
優先IUPAC名（2 S、3 R、4 S、5 R、6 R-2-[（5-ブロモ-4-クロロ-1H-インドール-3-イル）オキシ] -6-（ヒドロキシメチル）オキサン-3、 4，5-トリオール
識別子
CAS番号
7240-90-6 Y
3Dモデル（JSmol）
インタラクティブ画像 ChEBI CHEBI：75055 NSChemSpider 58680 NS
ECHA InfoCard 100.027.855
メッシュ X-galPubChem CID 65181 UNII V595OG374W Y InChI
InChI = 1S / C14H15BrClNO6 / c15-5-1-2-6-9（10（5）16）7（3-17-6）22-14-13（21）12（20）11（19）8（ 4-18）23-14 / h1-3，8，11-14，17-21H、4H2 / t8-、11 +、12 +、13-、14- / m1 / s1  NS キー：OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N  NS InChI = 1 / C14H15BrClNO6 / c15-5-1-2-6-9（10（5）16）7（3-17-6）22-14-13（21）12（20）11（19）8（ 4-18）23-14 / h1-3，8，11-14，17-21H、4H2 / t8-、11 +、12 +、13-、14- / m1 / s1
キー：OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNEBZ SMILES Brc3ccc2c（c（O 1O （（O）（O） 1O）CO）c 2） c3Cl
プロパティ
化学式
C 14 H 15 BrClNO 6
モル質量 408.629
特に明記されていない限り、データは標準状態（25°C 、100 kPa）の材料について示されてい NS 確認します YNS
情報ボックスの参照

コンテンツ
1 用途
1.1 反応 1.2 クローニング
1.2.1 バリアント
1.3 タンパク質間相互作用
2 も参照してください
3 参考文献

用途
X-galはラクトースの類似体であるため、D-ラクトースのβ-グリコシド結合を切断するβ-ガラクトシダーゼ酵素によって加水分解される可能性がX-galは、β-ガラクトシダーゼによって切断されると、ガラクトースと5-ブロモ-4-クロロ-3-ヒドロキシインドール-1を生成します。その後、後者は自発的に二量体化し、酸化されて5，5′-ジブロモ-4，4′-ジクロロ-インジゴ-2、不溶性の濃い青色の生成物になります。X-gal自体は無色であるため、青色の生成物の存在は、活性β-ガラクトシダーゼの存在のテストとして使用できます。これにより、細菌のβ-ガラクトシダーゼ（いわゆるlacZ）をさまざまなアプリケーションでレポーターとして使用することもできます。

反応

クローニング
遺伝子クローニング、X-GALは、細胞が機能発現するかどうかの視覚的指示として使用されるβガラクトシダーゼと呼ばれる技術で酵素を青/白スクリーニング。このスクリーニング方法は、成功したクローニング製品を他の失敗した製品と区別するための便利な方法です。
青/白スクリーニング法は、β-ガラクトシダーゼ遺伝子のα相補性の原理に依存しており、プラスミド内のlacZ遺伝子（lacZα）のフラグメントが細胞内の別の変異型lacZ遺伝子（lacZΔM15）を相補することができます。両方の遺伝子はそれ自体で非機能性ペプチドを生成しますが、一緒に発現すると、lacZαを含むプラスミドがlacZΔM15細胞に形質転換されると、機能性β-ガラクトシダーゼを形成します。活性β-ガラクトシダーゼの存在は、X-galを含むプレートで細胞を増殖させたときに検出される可能性があり、細胞内に沈殿した青色の生成物が特徴的な青色のコロニーをもたらしました。ただし、目的の遺伝子がプラスミドベクターにライゲーションされる可能性のあるマルチクローニングサイトは、lacZα遺伝子内にしたがって、ライゲーションが成功するとlacZα遺伝子が破壊され、α相補性も破壊され、機能的なβ-ガラクトシダーゼが形成されず、白いコロニーが生じます。正常にライゲーションされたインサートを含む細胞は、失敗した青色の細胞からの白色で簡単に識別できます。このテストに使用されるクローニングベクターの例は、pUC19、pBluescript、pGem-Tベクターであり、変異型lacZΔM15遺伝子を持つDH5αなどの特定の大腸菌宿主株の使用も必要です。多くの場合、X-Galを含むプレートもIPTG（イソプロピルβ – D -1-チオガラクトピラノシド）を含みます。IPTGはラクトースの化学構造類似体です。ただし、IPTGはβ-ガラクトシダーゼでは加水分解できません。IPTGは、lacリプレッサーに結合してDNAを放出し、転写を可能にするインデューサーとして使用されます。したがって、寒天プレートにIPTGが存在すると、β-ガラクトシダーゼの合成が増加します。

バリアント
X-galにはいくつかの変種がこれらは類似した分子ですが、わずかな違いがあり、主に信号として青以外の色を生成します。
短い名前
ロングネーム 色 ブルーギャル、ブルーギャル
5-ブロモ-3-インドリルβ- D-ガラクトピラノシド
ダークブルー
ローズギャル、サーモンギャル、Yギャル、レッドギャル
6-クロロ-3-インドリル-β- D-ガラクトピラノシド
ピンク
パープル-β – D – Gal
5-ヨード-3-インドリル-β- D-ガラクトピラノシド
パープル
マゼンタグルコシド、マゼンタ-GLC、マゼンタギャル
5-ブロモ-6-クロロ-3-インドリル-β – D-グルコピラノシド
マゼンタ
緑-β – D – Gal
N-メチルインドリル-β- D-ガラクトピラノシド 緑 マグカップ、ムガ
4-メチルウンベリフェリルβ- D-ガラクトピラノシド
蛍光（λ EX = 365nm、λ EMは455 =）

タンパク質間相互作用
でツーハイブリッド分析、βガラクトシダーゼは、互いに相互作用するタンパク質を同定するためのレポーターとして使用されてもよいです。この方法では、酵母または細菌系を使用して、タンパク質相互作用についてゲノムライブラリーをスクリーニングすることができます。スクリーニングされているタンパク質間に成功した相互作用がある場合、それはプロモーターへの活性化ドメインの結合をもたらすであろう。したがって、プロモーターがlacZ遺伝子に結合している場合、X-galの存在下で青色色素コロニーの形成をもたらすβ-ガラクトシダーゼの産生は、タンパク質間の相互作用の成功を示します。この技術は、10の周り未満の大きさのスクリーニングライブラリーに限定されてもよい6。 X-galの切断に成功すると、インドールの揮発により、著しく悪臭が発生します。

も参照してください
X-Gluc

参考文献
^ Horwitz JPおよび他7名、1964年。酵素活性の細胞化学的実証のための基質。I.いくつかの置換3-インドリル-β- D-グリコピラノシド。Journal of Medicinal Chemistry 7：574-575。
^ KiernanJA2007。酵素の検出と局在化のためのインディゴジェニック基質。Biotechnic＆Histochemistry 82（2）：73-103。
^ Sandhu、Sardul Singh（2010）。組換えDNA技術。IKインターナショナルパブリッシングハウス。NS。116. ISBN 978-9380578446。
^ 「IPTG-Bioline」。www.bioline.com 。
^ http://www.edvotek.com/300.051205.pdf
^ 「5-ブロモ-3-インドリルβ-D-ガラクトピラノシド」。取り出される4年2月2014。
^ 「サーモン-ギャル-PubChem」。取り出される4年2月2014。
^ 「Purple-beta-D-Gal-PubChem」。取り出される4年2月2014。
^ 「5-ブロモ-6-クロロ-3-インドリル-β-D-グルコピラノシド」。取り出される4年2月2014。
^ 「Green-β-D-Gal-Biotium、Inc」。取り出される4年2月2014。
^ 「4-メチルウンベリフェリルβ-D-ガラクトピラノシド」。取り出される4年2月2014。
^ Joung J、Ramm E、Pabo C（2000）。「タンパク質-DNAおよびタンパク質-タンパク質相互作用を研究するための細菌ツーハイブリッド選択システム」。Proc Natl Acad SciUSA。97（13）：7382–7。土井：10.1073 /pnas.110149297。PMC 16554。PMID 10852947。
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